产品简介：

　　本公司生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒是根据目前广泛应用的蛋白浓度检测方法之一BCA法研制而成。其操作简单，灵敏度高，所形成的颜色复合物稳定性佳，受干扰物质影响小。可检测浓度下限达25 μg/mL的蛋白样品，*小检测蛋白量达到0.5 μg，待测样品体积为1-20 μL。 本产品主要成分为：BCA二钠盐，无水碳酸钠，酒石酸钾，氢氧化钠，碳酸氢钠和硫酸铜。

　　包装内容：

　　保存条件：

　　蛋白标准品4℃保存，溶解后应放-20℃保存。其余试剂常温保存。有效期12个月。

　　使用方法：

　　1.取1 mL蛋白标准配置液加入到25 mgBSA的蛋白标准管中，完全溶解蛋白标准品，即为25 mg/mL的蛋白标准溶液。配制成的蛋白标准溶液可-20℃长期保存。

　　2.取适量25 mg/mL蛋白标准溶液，稀释至终浓度为0.5 mg/mL。标准品*好与蛋白样品用同样的溶液稀释。但为了简便起见，通常使用0.9% NaCl或PBS稀释标准品。

　　3.做标准曲线。将标准品按0，1，2，4，8，12，16，20μL加到96孔板中，不足20 μL的加标准品稀释液补足到20 μL。

　　4.将待测的蛋白样品稀释至合适浓度，加到96孔板中，使待测样品总体积也为20 μL。

　　5.根据样品数量，按50体积BCA试剂加1体积硫酸铜溶液(50：1)配制适量BCA工作液，充分混匀。BCA工作液室温24小时内稳定。

　　6.每孔加入BCA工作液200 μL，充分混匀(可将酶标板放在振荡器上振荡30s)，37℃放置30 min后，以标准曲线0号做参比，在562nm波长下比色测定，记录各孔吸光度值。(注：也可以在室温放置2 h，或60℃放置30 min。如果蛋白浓度较低，*好放在60℃条件下反应。)

　　7.以标准品蛋白含量(μg)为横坐标，吸光值为纵坐标，绘出标准曲线。根据所测样品的吸光值，在标准曲线上即可查得相应的蛋白含量(μg)，除以样品稀释液总体积(20 μL)，乘以样品稀释倍数即为样品实际浓度。

　　注意事项：

　　1.BCA法测定蛋白浓度受温度和时间的影响较大，吸光度值会随着时间的延长不断升高，且显色反应会因温度的升高而加快。如果不能**控制显色反应的时间和温度，建议每次测定都需要做标准曲线。

　　2.本试剂也适用与分光光度计测定，但需要根据测定的*小体积调整样品和BCA工作液的用量。

　　3.为保证蛋白的**定量，样品的提取和标准蛋白的配制*好选用相同的缓冲液，同时也要保证两者检测条件的一致性。如果缓冲液本身就有较高的背景值，建议使用其他的方法测定。

　　4.BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，可以兼容样品中高达5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20，Tween 60，Tween 80。但在样品含有脂类物质时将明显提高吸光度值。且受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响，需确保EDTA低于10mM，无EGTA，二硫苏糖醇或β-巯基乙醇低于1mM。不适用BCA法时建议使用其他方法测定。

G2026-BCA蛋白浓度测定试剂盒2020-10-28修改.pdf